• <source id="gr48s"><nav id="gr48s"></nav></source><rt id="gr48s"><optgroup id="gr48s"></optgroup></rt><rt id="gr48s"><optgroup id="gr48s"></optgroup></rt>

      <u id="gr48s"><noscript id="gr48s"></noscript></u>
      <cite id="gr48s"></cite>
      <rt id="gr48s"><optgroup id="gr48s"><acronym id="gr48s"></acronym></optgroup></rt>
    1. <rt id="gr48s"><meter id="gr48s"></meter></rt>

      <ruby id="gr48s"></ruby>

    2. <rt id="gr48s"><progress id="gr48s"></progress></rt>
    3. <rt id="gr48s"></rt>
      <tt id="gr48s"></tt>

      EN
      DNA Standards有擴增,而文庫沒有或Ct很大

      1、文庫接頭序列錯誤。核對文庫末端序列與試劑盒提供的引物序列是否匹配。 2、稀釋度過高。減少稀釋倍數,重復實驗。 3、文庫降解。文庫應現用現稀釋,稀釋好的文庫應置于冰上備用,用完丟棄。

      稀釋文庫Ct超過標準曲線有效Ct范圍

      1、Ct (稀釋文庫) < Ct (DNA Standard 1),提示文庫稀釋度不夠,多見于過度擴增的文庫。提高文庫稀釋倍數重復實驗。 2、Ct (稀釋文庫) > Ct (DNA Standard 6),提示文庫稀釋度過高或構建失敗。常規文庫在1/10,000左右的稀釋度時得到的Ct不應超過Ct (DNA Standard 6)。減少稀釋倍數重復實驗。

      文庫各稀釋度計算的初始文庫濃度差異超過10%

      1、移液精確度差。 2、所有試劑在使用前應充分解凍并徹底混勻。 3、文庫難于擴增。GC/AT含量過高或長度超過1 kb的文庫擴增效率較差,定量波動性大。 4、文庫降解。文庫應現用現稀釋,稀釋好的文庫應置于冰上備用,用完丟棄。

      文庫各稀釋度ΔCt與稀釋倍數差異不一致

      1、移液精確度差。 2、所有試劑在使用前應充分解凍并徹底混勻。 3、文庫難于擴增。GC/AT含量過高或長度超過1 kb的文庫擴增效率較差,定量波動性大。 4、文庫降解。文庫應現用現稀釋,稀釋好的文庫應置于冰上備用,用完丟棄。

      復孔重復性差

      1、移液精確度差。 2、所有試劑在使用前應充分解凍并徹底混勻。 3、儀器相關問題。確認所用ROX Reference Dye與定量儀器匹配。

      標曲擴增曲線分布不均一

      1、Ct (DNA Standard 6) - Ct (DNA Standard 5) < 3.1,提示反應體系有污染。應根據NTC陰性對照的融解曲線確認污染源(文庫污染或DNA Standards污染) 。 2、Ct (DNA Standard 2) - Ct (DNA Standard 1) < 3.1,提示基線(Baseline)設置不當。手動調整基線(Baseline)為1-3。 3、DNA Standards之間的ΔCt > 3.6,提示擴增效率差。確認所有試劑在使用前都已充分解凍并徹底混勻;確認所有組分濃度正確以及反應程序無誤;確認每三個復孔的數據Ct≤0.2,否則去掉。 4、長時間強光照射會導致2×SYBR qPCR Master Mix熒光值下降,進而造成ΔCt > 3.6。應按照推薦方式避光貯存試劑。

      R2 < 0.99

      1、受污染影響的標準品的Ct值未舍棄。 2、所有試劑在使用前應充分解凍并徹底混勻。 3、儀器相關問題。確認所用ROX Reference Dye與定量儀器匹配。 4、移液精確度差。

      擴增效率偏出90%-110%范圍

      1、如Ct (NTC) - Ct (DNA Standard 6) < 3或者Ct (DNA Standard 6) - Ct (DNA Standard 5) < 3.1,且計算擴增效率超過100%,提示反應體系有污染。應根據NTC陰性對照的融解曲線確認污染源(文庫污染或DNA Standards污染)。繪制標準曲線時,應先根據Ct (NTC)確定標準曲線有效Ct值范圍,舍棄受污染影響的Ct,使用剩余的Ct 繪制。 2、不恰當的基線(Baseline)設置會增大Ct (DNA Standard 1),進而影響擴增效率計算。手動調整基線(Baseline)為1-3循環。 3、移液精確度差。

      目前在第1頁, 共有7頁, 共有55條記錄 第一頁 上一頁 12345 下一頁 最后一頁 跳轉到
      彩668 www.catherinebroad.com:奇台县| www.ewunthegun.com:平湖市| www.lxglc.cn:美姑县| www.tryinghardminimalist.com:栾城县| www.elitetrainingca.com:正镶白旗| www.5517vpn.com:无锡市| www.jialeiren.com:阿拉善右旗| www.6565g.com:井研县| www.bluedragonservices.com:垦利县| www.dk992.com:南阳市| www.bristoldoors.net:白沙| www.szjrgb.com:西藏| www.dogfriendlyuk.com:翁牛特旗| www.0523163.com:滦平县| www.resultsseekers.com:乐清市| www.lemonadedoll.com:金乡县| www.resediservice.com:贵南县| www.cheapcialisnow.net:紫云| www.044m.com:孟津县| www.mikeharris-em.com:中方县| www.tabletite.com:高唐县| www.sh61554342.com:鄱阳县| www.airotours.com:河北区| www.beamourhair.com:桐梓县| www.hse6.com:闵行区| www.huaye-tj.com:银川市| www.dalyanpatiohotel.com:乌兰县| www.ziyuangx8.com:淮南市| www.705180.com:金塔县| www.agenciaaccords.com:方城县| www.birlacitywaterpark.com:灵寿县| www.zealousjourney.com:陆河县| www.955461.com:乃东县| www.xybww.cn:富蕴县| www.vacationsmaker.com:肇东市| www.heritage-academy.org:剑河县| www.reelgeeksguide.com:张家川| www.r7586.com:新源县| www.7vui.com:赞皇县| www.fnjsn.cn:海淀区| www.yuanrongxing.com:抚顺县| www.505love.com:宁蒗| www.wh-leadlaser.com:太康县| www.giggiblu.com:克东县| www.fenggongsi.com:沙田区| www.kbcnewshub.com:尼木县| www.javadshadkam.com:南安市| www.swaggjewels.com:临泽县| www.pentucketpride5k.com:商城县| www.ymzhby.com:昌宁县| www.57pinche.com:包头市| www.africanshawlsupplier.com:银川市| www.ypyqw.cn:苗栗县| www.cp8595.com:关岭| www.cccasas.com:辽阳县| www.200v200.com:长汀县| www.thegioiphim.net:庆元县| www.imagefilm-prod.com:宁津县| www.agrinafta.com:黎川县| www.yadu111.com:饶河县| www.hg62345.com:辽阳市| www.sortpix.com:论坛| www.aiellocalabro.org:泗洪县| www.uflytech.com:浦江县| www.xianguoss.com:翁牛特旗| www.dachadian.com:乌审旗| www.attitude-digital.com:闵行区| www.bildungerziehung.org:横峰县| www.guitar-building.com:同仁县| www.yr597.com:镇平县| www.fotoprincipediano.com:北宁市| www.ptlins.com:宝丰县| www.hzmdprint.com:桐梓县| www.diendankientruc.net:沧州市| www.tarotcardadvisor.com:崇仁县| www.rcybgg.com:清涧县| www.plasticdaisy.net:茶陵县| www.zjxklpme.com:武穴市| www.quizlanka.com:普宁市| www.ptcdw.cn:东平县| www.lettresamontaigne.net:彝良县| www.yz-tygy.com:宜丰县| www.oklahomatrivia.com:新沂市| www.cjbzg.cn:海口市|